产品货号：
BTN15-43020
中文名称：
狄斯瓦螨荧光定量PCR试剂盒(探针法)
英文名称：
Varroa destructor qPCR Kit(Probe Method)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测狄斯瓦螨的试剂盒。
狄斯瓦螨(Varroa destructor)是对世界养蜂业威胁最大的蜜蜂病虫害。200
年重新命名之前，它一直被称为雅氏瓦螨(Varroa jacobsoni Oudemans1904)。
2000年初，澳大利亚安德森(Denis L.Anderson)对采集自亚洲各地东方蜜蜂(蜂螨原始寄主)和世界各地西方蜜蜂的大量大蜂螨样本进行线粒体DNA测序的综合研究，结果表明:原被归入雅氏瓦螨的东方蜜蜂寄生螨，应划分为2个种，一个是新界定的雅氏瓦螨，主要分布在印尼和马来西亚，已发现9个基因型；另一个是新定名的狄斯瓦螨，分布于亚洲大陆的东方蜜蜂和世界各地的西方蜜蜂，已发现11个基因型。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：狄斯瓦螨荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Varroa destructor qPCR Kit(Probe Method)
狄斯瓦螨(Varroa destructor)是对世界养蜂业威胁最大的蜜蜂病虫害。200
年重新命名之前，它一直被称为雅氏瓦螨(Varroa jacobsoni Oudemans1904)。
2000年初，澳大利亚安德森(Denis L.Anderson)对采集自亚洲各地东方蜜蜂(蜂螨原始寄主)和世界各地西方蜜蜂的大量大蜂螨样本进行线粒体DNA测序的综合研究，结果表明:原被归入雅氏瓦螨的东方蜜蜂寄生螨，应划分为2个种，一个是新界定的雅氏瓦螨，主要分布在印尼和马来西亚，已发现9个基因型；另一个是新定名的狄斯瓦螨，分布于亚洲大陆的东方蜜蜂和世界各地的西方蜜蜂，已发现11个基因型。
- 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
- 引物和探针经过优化，灵敏性高。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据狄斯瓦螨高度保守区设计，不会跟其他病毒的DNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 2×Probe qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 狄斯瓦螨探针法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 狄斯瓦螨qPCR探针 | 50μL |
| 狄斯瓦螨探针法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。
- 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送50次免DNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号：BTN61202
下载。
三、Probe qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
成分 样品管 PCR阴性 曲线N+2个对照管样品管
(2～7管)2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 狄斯瓦螨qPCR探针 1μL 1μL 各1μL 狄斯瓦螨探针法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 7μL - - 超纯水 - 7μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) - - 各7μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：
过程 温度 时间 预热 50℃ 2min 预变性 95℃ 5min qPCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集FAM通道的荧光信号)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：狄斯瓦螨荧光定量PCR试剂盒(探针法)，Varroa destructor qPCR Kit(Probe Method)